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免疫親和柱采用高特異性的單克隆抗體,能夠簡(jiǎn)單高效的分離和純化食品和飼料中的霉菌毒素,同時(shí)具有高滲透性、無(wú)需附加壓力、低損耗等特點(diǎn)。測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過(guò)提取、稀釋,緩慢的通過(guò)親和柱,在柱內(nèi)河豚的毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用洗脫液洗脫河豚的毒素,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
免疫親和柱的特點(diǎn):
1、采用單克隆免疫技術(shù),可以有效性地將待測(cè)成分分離出來(lái),分離效率和回收率高,正確性和可靠性強(qiáng)
2、實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性好,重復(fù)性強(qiáng)。
3、純化過(guò)程簡(jiǎn)單快速,短時(shí)間即可處理大量樣品
4、實(shí)驗(yàn)設(shè)備輕便,自動(dòng)化程度高,操作簡(jiǎn)單,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員要求不高,可在小型試驗(yàn)場(chǎng)所使用。
5、無(wú)需有毒溶劑,實(shí)驗(yàn)過(guò)程安全可靠。
6、應(yīng)用范圍廣,可處理多種復(fù)雜樣品。
免疫親和柱的操作流程:
①提取:參照GB5009.118-2016中各法,對(duì)樣品進(jìn)行處理。
②凈化:以GB5009.118-2016為例說(shuō)明
(1)柱子預(yù)處理:取出親和柱,恢復(fù)至室溫,將上端塞子取出,打開(kāi)下端堵頭,將柱內(nèi)保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處,停止流液。
(2)加樣:加入處理好的提取濾液,打開(kāi)下端堵頭,調(diào)節(jié)流速至1滴/秒,直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去流出液。
(3)淋洗:液體*排凈后,用蒸餾水,淋洗,流速為1-2滴/秒,棄掉流出液,抽干。
(4)洗脫:加入甲醇(色譜級(jí)),調(diào)節(jié)流速為1滴/秒,緩慢洗脫,收集全部洗脫液,用甲醇(色譜級(jí))定容至(即為凈化后的樣品)。
(5)衍生:將凈化后樣品在50℃下用氮?dú)獯蹈桑尤攵谆被拎と芤汉洼祀嫒芤海跍u旋混合器上混勻,50℃反應(yīng),在冰水中冷卻后取出,50℃氮?dú)獯蹈桑昧鲃?dòng)相溶解,待檢測(cè)。
③檢測(cè)
凈化后樣品可直接用HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)等方法進(jìn)行檢測(cè)。
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